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怎么預(yù)防細(xì)胞污染?

 更新時(shí)間:2024-09-13 點(diǎn)擊量:77

一、前言

經(jīng)常做實(shí)驗(yàn)的小伙伴都知道,從事細(xì)胞培養(yǎng)工作時(shí)都有可能面臨細(xì)胞受到污染的境況。對于細(xì)胞的受污染問題,最為緊要的在于防范,因?yàn)橐坏┘?xì)胞受到污染,欲挽回已十分艱難,即便成功挽回,細(xì)胞的狀態(tài)亦會(huì)受損,進(jìn)而對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。因此,讓我們首先探討一下如何有效地進(jìn)行預(yù)防。

怎么預(yù)防細(xì)胞污染?

生物安全柜是細(xì)胞處理的主要場所,而培養(yǎng)箱是細(xì)胞生長的主要場所,所以細(xì)胞污染通常就發(fā)生在這兩個(gè)地方。那么在使用生物安全柜和培養(yǎng)箱時(shí)如何做好預(yù)防措施呢?

二、措施

1. 所有進(jìn)入安全柜的東西都要盡可能保證無菌

如果實(shí)驗(yàn)室條件允許,那直接購買商品化的試劑和耗材是最穩(wěn)妥的,他們的試劑和耗材一般只要是正品都可以保證無菌。如果試劑需要自己用干粉配制,那么在配制中需要嚴(yán)格按無菌操作進(jìn)行。另外每次試劑配制量不宜過多,比如wan全培養(yǎng)基建議以一到兩周內(nèi)用完為宜。

試劑在分裝時(shí)可以考慮再用針頭式過濾器過濾一次,減少污染的可能性。如果所用移液器吸頭是散裝的,則注意在將吸頭裝入吸頭盒時(shí)需要帶手套,因?yàn)闇缇鷷r(shí)無法完quan去除吸頭上可能粘附的油脂和其他雜質(zhì)。

2. 安全柜每次使用前需要紫外照射30min滅菌

安全柜需再通風(fēng)5min以上保證換氣到位。每次處理細(xì)胞前應(yīng)將實(shí)驗(yàn)需要的各種試劑、耗材備齊,盡量減少細(xì)胞處理過程中的來回走動(dòng)。安全柜內(nèi)的東西盡量擺放有序,具體可以根據(jù)個(gè)人使用習(xí)慣而定,如果你使用的是公用安全柜,則可能需要使用前臨時(shí)調(diào)整。

實(shí)驗(yàn)過程中所有試劑不用時(shí)需要蓋上瓶蓋,瓶蓋打開時(shí)除了干凈的吸頭,其他任何東西都不要從瓶口的上方經(jīng)過。如果使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)胞,則處理時(shí)不要長時(shí)間打開皿蓋。如果所用吸頭沒有濾芯,那在使用時(shí)注意不要將試劑倒吸入移液器,如果倒吸的是培養(yǎng)基,極易成為細(xì)菌生長的溫床。一把有菌的移液器可以輕松污染所有使用其處理過的細(xì)胞,所以一旦發(fā)生倒吸,要及時(shí)用酒精棉球擦去倒吸的試劑,有條件的建議使用帶濾芯的吸頭。

3. 使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)胞,放入培養(yǎng)箱前搖勻時(shí)要輕柔

不要將培養(yǎng)基搖到皿蓋和皿身的間隙中,這樣在細(xì)胞生長時(shí)很容易污染。如果使用瓶蓋沒有氣孔的細(xì)胞瓶培養(yǎng)細(xì)胞,放入培養(yǎng)箱前需要將瓶蓋擰松半圈左右,保證瓶內(nèi)外可以進(jìn)行氣體交換,注意不要擰太松,這樣在細(xì)胞生長時(shí)也很容易污染,有條件的建議選擇瓶蓋有氣孔的細(xì)胞瓶,這樣放入培養(yǎng)箱前直接擰緊瓶蓋即可。由于培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度和濕度很高,所以最好定期用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱消毒。培養(yǎng)箱里水槽中的水需要使用無菌水,不可以用自來水。

怎么預(yù)防細(xì)胞污染?

三、那么細(xì)胞如果還是不幸污染了又該怎么辦呢?

把細(xì)胞污染分為早期污染和晚期污染兩種情況。早期污染是細(xì)胞狀態(tài)變差,但依舊能保持生長,顯微鏡下未見明顯微生物或可見少量微生物。這種情況的話我們在換液時(shí)可以多用PBS洗幾次,然后加入適合的抗生素。早期污染只要發(fā)現(xiàn)及時(shí),處理得當(dāng),救回來的可能性還是很大的。

晚期污染則是細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,細(xì)胞停止生長,顯微鏡下可見大量微生物。這時(shí)候建議大家及時(shí)清理掉相關(guān)細(xì)胞,以免污染其他細(xì)胞。在對安全柜和培養(yǎng)箱進(jìn)行消毒后,再重新復(fù)蘇早批次的細(xì)胞。

細(xì)心的會(huì)發(fā)現(xiàn),新細(xì)胞收到后,不應(yīng)急于開展實(shí)驗(yàn),而應(yīng)該先小心培養(yǎng),凍存一到兩個(gè)批次的細(xì)胞后再開展實(shí)驗(yàn),這樣實(shí)驗(yàn)過程中如果細(xì)胞出現(xiàn)問題,可以有凍存細(xì)胞保證實(shí)驗(yàn)還能繼續(xù)進(jìn)行。

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