RNA提取試劑盒用于從細(xì)胞、組織、新鮮血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA,用LB10裂解樣品后,加入氯仿,溶液分為無(wú)色水相和粉紅色有機(jī)相,RNA在水相中;用RNA硅膠膜離心柱特異地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA),流出液中的smallRNA用miRNA硅膠膜離心柱特異地吸附。與其它miRNA提取方法相比,該試劑盒裂解能力強(qiáng)、提取量高、專(zhuān)一性強(qiáng),應(yīng)用范圍廣。
RNA提取試劑盒其主要特征在于分離裝置中采用纖維素為固相載體,利用融合蛋白CBD-SA作為生物橋聯(lián)劑,以生物特異性偶聯(lián)法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的物理吸附法和化學(xué)鍵合法活化纖維素固相載體,活化后的固相載體能夠高效率的結(jié)合生物素化的試劑,可用于蛋白或核酸的分離。構(gòu)建cDNA文庫(kù)、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR方法檢測(cè)稀有的mRNA等研究常常需要從總RNA中分離mRNA,mRNA只占總RNA的1%左右,但由于帶poly(A)尾巴,所以可以通過(guò)與Oligo(dT)的親和結(jié)合而與其RNA(如rRNA、tRNA等)分離開(kāi)。
RNA提取試劑盒使用方法:將0.5mL結(jié)合液加入到一管裝有1mgOligo(dT)纖維素的離心管中,放置5分鐘后離心吸棄上清后待用。將制備的總RNA100μL加熱到65℃5分鐘后加入等體積的結(jié)合液,轉(zhuǎn)移到裝有Oligo(dT)纖維素的離心管中,顛倒混勻數(shù)次,離心后將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)離心管中。用0.5mL結(jié)合液,混勻后4℃200g離心5分鐘,小心棄上清。重復(fù)上步洗3-5次,用RNase-free水洗脫mRNA,用微量核酸沉淀劑沉淀回收mRNA。